AAV核酸滴度定量檢測知多少

隨著基因治療技術日趨完善和臨床經驗不斷積累，監管機構對基因治療產品的質量控制也愈發嚴謹慎微。準確的滴度檢測是AAV基因治療藥物質控的重要組成部分，也是開展臨床研究的前提條件，AAV基因治療臨床試驗檢測方法匯總如下表。

其中核酸滴度檢測是以AAV衣殼中所含基因組作為定量依據，測定的是含有目標基因組的AAV濃度。AAV中包含的基因組是其表達蛋白或RNA的前提，是AAV藥物發揮藥效的核心和基礎。目前AAV核酸滴度檢測方法有點雜交法、分光光度計法和qPCR法，qPCR作為第二代PCR方法，是各大研究機構和藥企最廣泛采用的定量方法。然而qPCR技術存在較大局限性，如檢測結果只是相對標準曲線的“相對”定量，且反應容易受qPCR體系中酶或蛋白等成分的干擾，定量結果不夠精準等。

ddPCR方法 vs qPCR方法

• 數字PCR（ddPCR）被稱為第三代PCR技術，與qPCR技術相比具有以下顯著優勢：
•  ddPCR無需標準曲線即可對目標分子進行絕對定量；
• ddPCR有更高的準確度，定量CV值通常小于10%；
• dPCR抗干擾能力更優，有實驗顯示，ddPCR檢測AAV樣本的穩定性高于qPCR技術[1]。

qPCR方法與數字PCR方法優劣勢比較

另一組測試數據也顯示[2]，優化后的qPCR方法中位CV分別為5.35%和4.37%，最大值分別為33.2%和8.7%，而數字PCR用三個獨立引物探針組的中位CV值為2%或更低，且分布更密集，可見數字PCR方法定量更加準確，重復性更高。

從監管趨勢來看，美國藥典在細胞和基因治療標準品章節中明確寫道，AAV標準品定量將會使用數字PCR進行定量，可見數字PCR方法在細胞和基因治療領域中絕對定量的突出優勢。

達普生物AAV核酸滴度數字PCR定量試劑盒邀請廣大客戶進行內部測試

綜上所述，在以AAV為遞送載體的基因治療產品的定量檢測中，ddPCR技術已受到越來越多業內人士的青睞，為了滿足廣大客戶的需求，達普生物即將推出其自主研發的AAV基因組ddPCR精準定量試劑盒。北京西美杰科技有限公司作為達普生物中國總代理，現攜手達普生物開展“AAV核酸滴度數字PCR定量試劑盒免費測試活動”。

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參考文獻：

1. Dobnik, David, et al.2019:1570.，Dobnik, David, et al. "Accurate quantification and characterization of adeno-associated viral vectors." Frontiers in microbiology (2019): 1570.
2. Martin Lock, Mauricio R. Alvira, Shu-Jen Chen, and James M. Wilson. Absolute Determination of Single-Stranded and Self-Complementary Adeno-Associated Viral Vector Genome Titers by Droplet Digital PCR.HUMAN GENE THERAPY METHODS 25:115–125 (April 2014)